E花环形成的原理是什么

E花环形成的原理是什么

　　E花环你听说过吗?是不是以为是什么新型的花环编织方法?E花环是一种花环形成细胞，它的实验是一种体外检测人和动物细胞免疫功能的方法，常用于T淋巴细胞计数。你对E花环知道多少?下面由学习啦小编为你详细介绍。

　　E花环形成的原理：

　　T淋巴细胞表面有绵羊红细胞(SRBC)的受体(CD2)，存在于95%成熟T淋巴细胞表面，能与绵羊红细胞结合，经染色后，可见红色的绵羊红细胞与中央的蓝色淋巴细胞组成玫瑰花瓣状，形成花环样，称为E花环。凡表面粘附有3个或3个以上绵羊红细胞(SRBC)者为花环形成细胞(即E阳性细胞)。

　　E花环实验原理：

　　免疫学上用来检测T细胞数量的一种实验方法，T细胞表面具有能与绵羊红细胞(SRBC)表面糖肽结合的受体，称为E受体(CD2)。CD2 是一种糖蛋白，相对分子质量为30 000～60 000，已证实E受体是人类T细胞所特有的表面标志。当T细胞与SRBC混合后，SRBC便粘附于T细胞表面，呈现花环状。通过花环形成检查T细胞的方法，称为E花环形成试验。根据花环形成的多少，可测知T细胞的数目，从而间接了解机体细胞免疫功能状态，判断疾病的预后，考核药物疗效等。

　　实验操作方法：

　　1.用分层液密度梯度离心法分离淋巴细胞，计数后，用Hanks液配成107个/ml细胞悬液。

　　2.取0.1 ml淋巴细胞悬液，加入0.1 ml 1% SRBC及0.05 ml灭活小牛血清，混匀。

　　3.37℃静置5分钟，500 rpm低速离心5min后，放入冰箱，2小时或过夜。

　　4.取出试管，吸弃上清液，加0.8%戊二醛溶液1 滴，轻轻旋转混匀，置4℃冰箱固定15分钟。

　　5.取出后，轻轻旋转试管，使沉淀细胞重新悬浮;取1滴涂片，自然干燥后，瑞氏染色，高倍下观察。

　　凡能结合3个SRBC者即为E花环阳性细胞。计数200个淋巴细胞，算出花环形成细胞百分率。

　　实验注意事项：

　　1.SRBC最好是新鲜的，一般采血后保存在Alsever保存液中，2周内可以用，超过2周SRBC与淋巴细胞的结合能力下降。

　　2.从采血到测定，不得超过4小时，若用分离的淋巴细胞，放置时间也不得超过4小时，否则SRBC受体会自行脱落。同时用锥虫蓝检查活力，活细胞不少于95%。

　　3.计数前应将沉于管底的细胞予以重悬，但只宜轻缓旋转试管，使细胞团块松开即可，不能过猛或强力吹打，否则花环会消失或减少。

　　4.要求全部试验在室温(16～23℃)中进行。

　　实验材料：

　　1.肝素抗凝血2 ml。

　　2.聚蔗糖-泛影葡胺分层液。

　　3.pH7.2～7.4 Hanks液。

　　4.瑞氏染色液。

　　5.0.8%戊二醛溶液(用Hanks液将戊二醛配成0.8%，然后用1 mol/L NaOH将pH调至7.2～7.4)。

　　6.吸收灭活的小牛血清(小牛血清经56℃ 30分钟灭活后，取1体积压积SRBC，加2体积灭活小牛血清，混匀后置37℃ 30分钟，离心沉淀红细胞，吸取上清，放4℃冰箱保存备用)。

　　7.1% SRBC悬液(无菌脱纤维的绵羊静脉血100 ml加Alsever保存液50 ml，置4℃冰箱保存，一般不宜超过2周。用前以Hanks液洗3次，1 500转/分 10分钟，弃上清，将压积红细胞用Hanks液配成1 %SRBC悬液，细胞浓度约为8×107个/ml)。

　　E花环形成实验临床意义：

　　E花环值增高

　　见于甲状腺功能亢进、甲状腺炎、重症肌无力、慢性活动性或迁延性肝炎、sle活动期以及器官移植排斥反应等。

　　E花环值减低

　　见于免疫缺陷性疾病，如恶性肿瘤、免疫性疾病、某些病毒感染、大面积烧伤、多发性神经炎、淋巴增值性疾病。