学习啦>脑力开发>智商IQ>相关报道>

脆性X智力低下基因有什么研究

时间: 祥聪1199 分享

  检测脆性X染色体综合征智力低下基因FMR1中(CGG)n拷贝数的多态性。下面小编为你整理脆性X智力低下基因FMR1中不稳定DNA序列的研究,希望能帮到你。

  【摘要】 目的 检测脆性X染色体综合征智力低下基因FMR1中(CGG)n拷贝数的多态性。 方法 采用PCR结合序列胶银染法、Southern blot杂交分析法,对299条表型正常的湖南省人群X染色体FRAXA位点(CGG)n拷贝数的多态性及分布频率进行了测定和验证。 结果 显示其范围为20~40,高峰为28,PCR-序列分析银染法结果与Southern blot法结果完全一致。 结论 检测了湖南省人群X染色体FRAXA位点(CGG)n拷贝数的多态性;运用PCR-序列分析胶银染法快速、直接、简便、实用,适合脆性X综合征的大规模群体筛查。

  【关键词】 脆性X综合征 FMR1 (CGG)n PCR

  脆性X综合征(fragile X syndrome,FraX)是常见的遗传性智力低下性疾病之一,其发病率仅次于唐氏综合征。在人群中男性的发病率约为1/4000 [1] ,女性的发病率为1/2500 [2] 。其在细胞学上主要表现为Xq27.3带处有一细丝样的脆性位点(FRAXA) [3] ,在分子水平上表现为FMR1基因5'端(CGG)n的异常扩增。(CGG)n在正常人群体中呈多态性,n=6-50,当n=50-200时为前突变,n>200时为全突变,同时伴随其周围CpG岛异常甲基化 [4] 。我们根据FraX基因致病特点,通过测定湖南省人群中CGG重复序列,了解其分布的多态性,并建立一个简便、快捷的基因检测方法。

  1 材料和方法

  1.1 研究对象及标本 208名人群为本校附属医院门诊自愿受检者,男117名,女91名,年龄24~56岁,平均36.5岁。分别从肘静脉抽取血1~2ml,以草酸钾抗凝,标本按碘化钾法提取DNA。

  1.2 主要试剂 T 4 多聚核苷酸激酶、PBR322/MSPI、7-deaza-dGTP等均为NEB公司产品,杂交液、尼龙膜、PCR扩增相关试剂均购自上海生工,探针PE5.1由美国纽约州立发育不全基础研究所Nanbert Zhong博士惠赠。

  1.3 PCR扩增 PCR引物设计参照文献 [5] ,在FMR1基因内(CGG)n重复区域两侧合成引物。其中上游引物为:5'-GGAACAGCGTTGATCACGTGACGTGGTTTC-3',下游引物为:5'-GTGGGCTGCGGGCGCTCGAGG-3'。反应体积为20μl,其中包括10×PCR缓冲液,50~100ng模板,每种引物5pmol,200μmol/LdNTP,其中dGTP中75%为7-deaza-dGTP,10%DMSO,1UTaq DNA聚合酶。反应程序为:95℃预变性5min,95℃1min,65℃1min,72℃2min,进行30个循环,最后72℃延伸10min。

  1.4 PCR产物的序列胶银染法检测 取10μl PCR产物加入载样缓冲液于6%序列胶电泳。电泳毕经乙酸固定、Ag-NO3溶液染色及Na 2 CO 3 显示后观察结果。

  1.5 Southern印迹杂交 取5μl PCR产物于6%序列胶电泳,常规电转膜,用5′末端标记法以γ- 32 P-ATP标记探针PE5.1,经预杂交4h,杂交2h,充分洗膜后常规压片,-70℃放射自显影。

  2 结果

  2.1 湖南省人群中FRAXA位点(CGG)n的多态性及分布频率用PCR方法分析了299条X染色体。经序列胶测定(图2),Southern印迹杂交法验证(图3),表明(CGG)n的拷贝数在20~40之间(见表1),频率最高的为28(图1)。

  表1 湖南省人群中299条X染色体的CGG重复数 CGG重复数 等位基因数 构成比(略)

  图1 299条X染色体的(CGG) n 多态性分布图 2.2 6%序列胶电泳检测PCR产物 见图2。

  2.3 Southern blot检测PCR产物 Southern印迹杂交结果显示PCR扩增产物区带所在位置与图2完全一致(见图3)。

  3 讨论

  3.1 湖南省人群中FRAXA位点(CGG)n的多态性 299条M:PBR322/MSPI;1,2,3,4,5,6分别表示CGG重复数为28,28,31,28,28,29第1,6道为正常女性,第2,3,4,5道为正常 男性(下同)。

  图2 6%序列胶电泳

  图3 Southern印迹杂交

  表型正常的湖南省人群X染色体FRAXA位点(CGG)n测定结果显示,其拷贝数范围为20~40,高峰为28,占被检总数的64.88%。Hofstee [6] 等报道的(CGG)n峰值为28,Jacobs [7] 等研究发现有2个高峰,即:19~23和28~31。本文结果与文献报道基本相符,但未见到明显的终端重复数,说明选取样本有限。

  3.2 PCR-序列分析胶银染法的运用 目前已有多种筛查及诊断FraX的方法,但不同方法各有其局限性。如细胞遗传学分析虽可以直接观察染色体脆性位点的病变,但此方法检出率较低;DNA连锁分析较细胞遗传学分析增加了可信度,但该技术需要有先证者,致使检测受到一定程度的限制;经典的Southern blot法虽然准确性很高,但需要用同位素来标记,给操作者带来了一定的危害,并且操作繁杂,费用昂贵,耗时长;常规的PCR法虽简便,但因无法打开CG含量高的DNA模板导致扩增失败。因此,探索出一个稳定、快速、适合大规模人群筛查FraX的方法具有重要的意义。我们通过用7-deaza-dGTP代替dGTP的改良以降低Tm值,对299条X染色体的FRAXA位点(CGG)n进行了扩增,取得了较好的效果。检测结果显示湖南省人群的高峰为28,而且PCR序列胶银染法与PCR-Southern blot法结果完全一致。因此。该方法对FRAXA的大量群体筛查具有重要的意义。


智力相关报道相关文章:

1.智商IQ相关新闻报道

2.瞬间记忆是否与智商有关

3.构成智商的五种因素

4.智商测试

5.智商测试76分 8岁石家庄男孩入学遭拒

4029787